Standardową metodą badania jest scratch test, który polega na przeciąganiu końcówką pipety przez szkiełko, tym samym tworzeniu przerwanej linii. Nie jest to wysoce efektywne rozwiązanie, ponieważ pojedyncze komórki mogą zostawać na powierzchni szkiełka, a brzegi mogą być nierówne. Alternatywą może być zastosowanie insertów ibidi. Wykonane one są z biokompatybilnego silikonu, który umożliwia idealne przyleganie do podłoża (bez użycia kleju). Po usunięciu insertu z szalki, tworzy się równa przestrzeń do zarastania. Inserty występują w trzech wariantach: podwójne, potrójne i poczwórne, dzięki czemu można badać nawet do 4 różnych typów komórek.

„All in one”

Zastosowanie szkiełek „all in one” zapewnia szybkie i proste przygotowanie preparatu. Zastosowanie niewielkiej ilości komórek i małej objętości odczynników pozwala na poprawę analizy statystycznej, dzięki możliwości wielokrotnego powtarzania eksperymentów, a także wpływa na oszczędność środków finansowych.

Immunofluorescencja

Do immunofluorescencji można wykorzystać m.in. kilka specyficznych szkiełek: tradycyjne wielokomorowe, wielokomorowe z usuwalnymi ściankami z biokompatybilnego silikonu (którą w późniejszej fazie można zdjąć do płukania, barwienia i zaklejania preparatu) oraz szkiełka „all in one”.

Obserwacje pod mikroskopem – liczba Abbego

Liczba Abbego wyraża wartość dyspersji. Oblicza się ją ze współczynników załamania trzech różnych długości fal. Im jest ona wyższa, tym lepsza jest jakość optyczna mikroskopii. Materiał, którego liczba Abbego jest większa niż 55 uważa się za odpowiedni do wysokiej rozdzielczości mikroskopii – np. ibidi Polymer Coverslip ma liczbę Abbego 56.

Badania w przepływie. Obserwacje przeżyciowe

Możliwe jest także wykonywania badań w warunkach przepływu dzięki zastosowaniu pompy. Technika ta pozwala na obserwację komórek podczas pracy w inkubatorze CO2. Na rynku oferowane są dedykowane szkiełka do badania przepływu o różnych parametrach: wielkości, szerokości kanałów, ilości dołków itp.

Rozwiązaniem jest stosowanie systemu do podtrzymywania stałej temperatury i inkubacji żywych komórek podczas obrazowania. Systemy te są kompatybilne z każdym dostępnym na rynku zestawem mikroskopu odwróconego m.in.: Zeiss, Olympus, Nikon, Leica. System ten zapewnia: stałą temperaturę oraz stężenie CO2/O2, odpowiednią wilgotność oraz redukcję ewaporacji (brak kondensacji przez ogrzewaną płytkę), bardzo szybką regulację temperatury, niskie koszty, możliwość przeniesienia systemu na inny mikroskop oraz kompatybilność z systemem dostarczonych pomp.

Autor: Magdalena Walawender,
Specjalista ds. badań komórkowych i obrazowania, AnimaLab