Pierwszym krokiem na drodze biologii molekularnej jest wydzielenie i ocena jakości kwasów nukleinowych. Obecnie istnieje wiele sposobów wydzielania i oczyszczania DNA i RNA: fenolowo-chloroformowa, solna, adsorpcji na dwutlenku krzemu, jonowymienna chromatografia itd. Ich wybór zależy od rodzaju badanego materiału oraz technik stosowanych w dalszych etapach badań. Podczas kursu uczestnicy praktycznie będą wydzielać DNA i RNA z tkanek zwierzęcych i roślinnych. Następnie zmierzą ilość wydzielonych kwasów nukleinowych i ocenią ich jakość (stopień oczyszczenia od białek, polisacharydów; stopień degradacji).
Drugim etapem jest powielenie wybranego fragmentu DNA w polimerazowej reakcji łańcuchowej – PCR. Obecnie jest to jedna z najczęściej stosowanych metod zarówno w badaniach podstawowych jak i aplikacyjnych. Reakcja PCR jest również wstępem do sekwencjonowania DNA, analizy mikrosatelit oraz badania polimorfizmu. Obecnie istnieje wiele wariantów reakcji PCR – przepisania RNA na cDNA i PCR – RT-PCR; jednoczesnej amplifikacji kilku rejonów DNA – multipleks-PCR; losowej amplifikacji DNA – RAPD; wykrywania śladowych ilości DNA za pomocą dwóch kolejnych reakcji – zagnieżdżony(nested) PCR. Ich wybór zależy od badanego materiału i celu badań.
Niniejszy kurs umożliwi Państwu praktyczne i teoretyczne zapoznanie się z tymi metodami. Kierowany jest on zarówno do osób, które pracują w laboratoriach jak i do osób, które tylko teoretycznie wykorzystują metody molekularne w swojej pracy.
Program
|
Dzień 1 |
|
|
09:00– 09:15 |
Otwarcie Kursu |
|
09:15– 10:15 |
Metody wydzielania kwasów nukleinowych – wykład I |
|
10:15– 11:15 |
Podstawy i typy reakcji PCR – wykład II |
|
11:15– 11:45 |
Izolacja DNA z tkanek zwierzęcych - ćw. 1 |
|
11:45– 12:00 |
Przygotowanie żelu agarozowego |
|
12:00– 12:45 |
Izolacja DNA z tkanek roślinnych – ćw. 2 |
|
12:45– 13:15 |
Izolacja DNA z bakterii – ćw. 3 |
|
13:15– 13:45 |
Elektroforeza wydzielonego DNA w żelu agarozowym z ćw. 1 - 3 |
|
13:45– 14:15 |
Przerwa obiadowa |
|
14:15– 14:45 |
Spektrofotometryczny pomiar ilości oraz ocena czystości DNA (Nanodrop) z ćw. 1– 3 |
|
14:45– 15:15 |
Ocena wyników ćw. 1– 2 |
|
15:15– 15:45 |
PCR bez wydzielania DNA – ćw. 4. Cz. 1 - nastawienie reakcji PCR |
|
15:45– 16:00 |
RFLP-PCR – ćw. 7. Cz. 1 - Nastawienie reakcji PCR |
|
Dzień 2 |
|
|
09:00– 09:15 |
RFLP-PCR – ćw. 7. Cz. 2 - Trawienie produktu PCR enzymem restrykcyjnym |
|
09:15– 09:45 |
Dobór optymalnej temperatury reakcji – gradientowy PCR Cz. 1 - Nastawienie reakcji PCR– ćw. 5 |
|
09:45– 10:15 |
Izolacja RNA – ćw. 6 |
|
10:15– 10:30 |
Elektroforeza wydzielonego RNA w żelu agarozowym cd ćw. 5 |
|
10:30– 11:00 |
Reakcja RT-PCR – ćw. 6. Cz. 1– synteza cDNA |
|
11:00– 11:15 |
Przerwa |
|
11:15 – 12:15 |
Optymalizacja reakcji PCR– wykład III |
|
12:15 – 12:45 |
Reakcja RT-PCR– ćwiczenie 5. Cz. 2 – nastawienie reakcji PCR |
|
12:45 – 13:00 |
Multipleks-PCR – ćw. 8. Cz. 1 - Nastawienie reakcji PCR |
|
13:00 – 13:15 |
RFLP-PCR – ćw. 7. Cz. 3 – elektroforeza produktów trawienia |
|
13:15 – 13:30 |
Przerwa |
|
13:30 – 14:00 |
Spektrofotometryczny pomiar ilości oraz ocena czystości RNA (Nanodrop) z ćw. 5 |
|
14:00 – 14:15 |
Elektroforeza produktów PCR z ćw. 5 - 8 |
|
14:15 – 15:15 |
Projektowanie starterów do reakcji PCR – wykład V |
|
15:15 – 15:30 |
Ocena wyników ćw. 5 - 8 |
|
15:30 |
Zakończenie kursu |
Pozostałe informacje
Kurs rozpocznie się 22-go lutego o godz. 9:00 w Pracowni Technik Molekularnych i Biometrycznych Muzeum I Instytutu Zoologii, ul Wilcza 64, Warszawa..
Karty Zgłoszenia oraz opłaty należy przesyłać do dnia 18 lutego 2013 r.
Ponieważ ilość miejsc jest ograniczona organizatorzy zastrzegają sobie prawo do wcześniejszego zamknięcia listy w przypadku wyczerpania wolnych miejsc.
E-mail: mbs@mbs.biz.pl
Wszelkich informacji udzielają:
Dr Arleta Malewska: mbs@mbs.biz.pl, Tel (22) 401 10 38; 607 929 471
Dr hab. Tadeusz Malewski: tmalewski@miiz.waw.pl
Opłata za udział w warsztatach wynosi 1420 zł brutto.
Opłata obejmuje: koszty zajęć praktycznych i wykładów, materiały szkoleniowe, koszty organizacyjne i serwis kawowy .
Opłatę należy wpłacić na konto:
MBS Szkolenia, Konferencje, Usługi Sp. z o.o.
03-766 Warszawa, ul. Grajewska 6/8 m. 26
Bank Polska Kasa Opieki S.A. Oddział w Warszawie
80 1240 6074 1111 0010 4915 6042
NIP 113 286 12 19; REGON 146448470; KRS 0000444499
Przy wpłacie prosimy o podanie nazwiska osoby, której udział w kursie jest opłacany.
Uczestnicy otrzymają okolicznościowy certyfikat ukończenia szkolenia
