Jedna z najbardziej znanych endopeptydaz produkowana jest również w Polsce. Produkcją tego enzymu zajmuje się firma A&A Biotechnology.

Proteinaza K należy do rodziny proteaz subtylizynowych (S8) działających w szerokim zakresie. Enzym jest niezwykle skuteczny w degradacji natywnych i zdenaturowanych białek. Jest rekomendowana do szybkiej dezaktywacji endogennych RNAz i DNAz w procesie izolacji kwasów nukleinowych.

„Produkowana przez naszą firmę rekombinowana Proteinaza K wykazuje aktywność identyczną z dostępnymi na rynku preparatami. Ponadto enzym jest w pełni kompatybilny ze wszystkimi enzymami do izolacji kwasów nukleinowych produkowanych przez naszą firmę.”-  mówi dr inż. Sławomir Dąbrowski

Rys. 1 Porównanie aktywności komercyjnie dostępnych preparatów proteinazy K z proteinazą K firmy A&A Biotechnology.

Łańcuch polipeptydowy proteinazy K składa się z 278 aminokwasów, posiada masę molekularną 28930 Da. Centrum aktywne proteinazy K zbudowane jest z triady katalicznej, tworzonej przez Asp39, His69 i Ser224. Enzym uzyskuje pełną aktywność w obecności jonów Ca²⁺ i w zakresie pH od 7,5 do 12,0. Proteinaza K w niskich stężeniach (~ 0.01 mg/ml) ulega autohydrolizie, ale wykazuje wysoką stabilność w stężonych preparatach, gdzie jej stężenie przekracza 1 mg/ml . 

Rys. 2 Porównanie aktywności w różnych temperaturach komercyjnych preparatów proteinazy K z proteinazą K firmy A&A Biotechnology.

Enzym ten hydlolizuje białka stosunkowo niespecyficznie preferując, podobnie jak inne proteazy z rodziny subtylizyny, aminokwasy aromatyczne i hydrofobowe w pozycji P1. Do zalet  rekmbinowanej Proteinazy K produkowanej przez  A&A Biotechnology można zaliczyć przede wszystkim najwyższą jakość uzyskaną dzięki minimalnemu poziomowi zanieczyszczeń.

Innowacyjna technologia oczyszczania pozwoliła na stworzenie preparatu pozbawionego zanieczyszczeń. Cieszący się ogromnym zainteresowaniem enzym jest całkowicie wolny od RNAz i DNAz.

Rys. 3 Wyniki izolacji chromosomalnego DNA z użyciem zestawów firmy A&A Biotechnology oraz proteinazy firmy A&A Biotechnology (ścieżki A) i komercyjnej rekombinowanej proteinazy K  (ścieżki B). DNA izolowano z: tkanki (zestaw Genomic Mini AX Tissue); hodowli E. coli zawierającej plazmidowe DNA (zestaw Mini AX Bacteria); z krwi (zestaw Genomic Mini AX Blood); hodowli drożdży P. pastoris (zestaw Genomic Mini AX Yeast). M1 – DNA faga Lambda ; M2 – marker wielkości fragmentów DNA – DNA faga lambda trawione restryktazą AvaII (A&A Biotechnology).

Red.Agata Bednarek

Referencje: A. Burkiewicz, S. Dąbrowski, P. Barski. Polska rekombinowana proteinaza K. Postępy Biochemii 2007: 53(4) 327-328.