głównym problemem w obserwowaniu produkcji wirusa HIV
de novo w komórkach dendrytycznych jest brak rozdziału między wirusem znajdującym się w cytozolu (niedojrzałym) antygenem gag HIV a formą dojrzałą w formie endocytarnej. By śledzić produkcję wirusa HIV, Robiani i wsp. opracowali infekcyjny konstrukt HIV niosący oporne na diotiol motywy tetracysteionwe (dTCM) na C-końcu matrycy p17 HIV w białku gag wirusa. Przy użyciu konstruktu oraz barwników biarsenowych zaobserwowali ograniczoną barwliwość gag w cytozolu komórek dendrytycznych. jednoczesne barwienie przy uzyciu przeciwciał skierowanych przeciwko białku gag, reaktywnych tak w stosunku p17 jak i p24 pozwalało na wykazanie, preferencyjne, cząstek wirusowych i umożliwiło namierzenie wirusa w różnych stadiach jego cyklu w komórkach dendrytycznych. Także w momencie jego transmisji na sąsiednie komórki dendrytyczne i limfocyty T. Dzięki temu można stwierdzić, że barwienie HIV gag przy pomocy układu barwników biarsenowych
in situ umożliwia charakteryzowanie i określanie lokalizacji namnażającego się wirusa w zakażonych komórkach oraz jego transferu do sąsiednich leukocytów.
Nature Methods; 2.12.2007; Stuart G Turville, Meropi Aravantinou, Hella Stössel, Nikolaus Romani & Melissa Robbiani
KOMENTARZE