Promotory są jednymi z najważniejszych regionów regulatorowych w sekwencjach genomowych. Wykorzystuje się je w wielu procesach biotechnologicznych w celu indukcji ekspresji danego genu w specyficznych warunkach. Nowa metoda poszukiwania takich regionów została opracowana. Genomowe DNA E. coli zostało amplifikowane z użyciem przypadkowych starterów oraz ddNTP. Taki system przewiduje produkcję określonej wielkości fragmentów DNA różniących się w jedną parą zasad.
Fragmenty tworzone w tej reakcji miały długość około 100 nukleotydów.
Następnie cięto je endonukleazą w celu uzyskania tępo zakończonych cząsteczek podwójnego DNA, które klonowano do wektora zawierającego gen LacZ. Tak przygotowaną biblioteką transformowano komórki E. coli, obserwowano wzrost i tworzenie się niebieskich kolonii na podłożu warunkującym wysokie ciśnienie osmotyczne. Dzięki tej metodzie wykryto nowy promotor indukowalny w warunkach szoku osmotycznego, który może znaleźć zastosowanie w procesach biotechnologicznych.
Wang Z., Jin L., Węgrzyn G., Węgrzyn A., Screening of the osmotic pressure-inducible promoter regions from the whole genome of Escherichia coli by using a novel
Nowatorska metoda klonowania w poszukiwaniu regionów promotorowych
09.05.2008
KOMENTARZE