Profilowanie ekspresji genów metodą qPCR
Real-time PCR, czyli PCR w czasie rzeczywistym, zwany również ilościowym PCR (qPCR), stanowi modyfikację klasycznej reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR). Modyfikacja ta, przy zastosowaniu odpowiednich barwników i sond oraz odpowiedniej aparatury, umożliwia monitorowanie przyrostu produktu w każdym kolejnym cyklu trwania reakcji. Technika znalazła szerokie zastosowanie m.in. w badaniach naukowych, diagnostyce medycznej, kryminalistyce, przemyśle spożywczym itd.. Rozwój aparatury umożliwiającej jednoczesną analizę 384, 1536, 5184 próbek pozwala stwierdzić, że metoda ta należy do wysokoprzepustowych i może być z powodzeniem stosowana do profilowania ekspresji genów.
Uczestnicy kursu zapoznają się z przebiegiem qPCR, kluczowymi parametrami wpływającymi na wynik reakcji, sposobami optymalizacji reakcji, doborem właściwych genów referencyjnych oraz analizą wyników nie tylko metodami standardowymi (podwójnej delty, Pfaffla) ale również zgodnej z wymaganiami MIQE (Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiment) normalizacją ekspresji genów do średniej geometrycznej z kilku genów referencyjnych. Wszystkie ćwiczenia uczestnicy wykonują w parach.
Zarówno podczas kursu jak również po kursie uczestnicy mogą konsultować swoje problemy z zakresu prowadzenia doświadczeń i analizy wyników qPCR. Mamy nadzieję, że tegoroczny kurs będzie okazją do pogłębienia teoretycznej i praktycznej wiedzy z dziedziny qPCR oraz stworzy możliwość kontaktu osób z różnych środowisk naukowych.
PROGRAM KURSU
|
1 dzień |
|
|
09:00 – 09:10 |
Otwarcie kursu |
|
09:10 – 09:20 |
Wprowadzenie do kursu |
|
09:20 – 10:20 |
Metody do profilowania ekspresji genów – wykład I |
|
10:20 – 10:50 |
Wydzielenie całkowitego RNA – ćw. 1 |
|
10:50 – 11:20 |
Sprawdzenie jakości wydzielonego RNA – ćw. 2 |
|
11:20 – 11:50 |
Oczyszczenie RNA od śladów DNA – ćw. 3 |
|
11:50 – 12:10 |
Synteza cDNA – ćw. 4 |
|
12:10 – 12:30 |
Przerwa |
|
12:30 – 13:30 |
Ilościowy PCR (qPCR) – wykład 2 |
|
13:30 – 13:45 |
Przygotowanie wzorca – ćw. III Cz. 1. Nastawienie reakcji PCR |
|
13:45 – 14:45 |
qPCR – warunki reakcji i wzorce: optymalizacja – wykład 3 |
|
14:45 – 15:15 |
Przerwa |
|
15:15 – 15:45 |
Przygotowanie wzorca – ćw. III Cz. 2. Oczyszczenie produktów reakcji PCR |
|
15:45 – 16:00 |
Przygotowanie wzorca – ćw. III Cz. 3. Pomiar ilości produktów reakcji PCR |
|
2 dzień |
|
|
09:00 – 09:20 |
Analiza ekspresji genów (metoda bezwzględna) – ćw. IV |
|
09:20 – 09:40 |
Porównanie ekspresji genów referencyjnych – ćw. V |
|
09:40 – 10:40 |
qPCR – analiza wyników – wykład 4 |
|
10:40 – 11:00 |
Przerwa |
|
11:00 – 12:00 |
Krzywe topnienia i High Resolution Melting PCR – wykład 5 |
|
12:00 – 12:15 |
Omówienie wyników doświadczenia 4 |
|
12:15 – 12:30 |
Określenie względnego tempa ekspresji genów (metoda podwójnej delty, metoda Pfaffa) – ćw. VI |
|
12:30 – 13:30 |
Aparatura i odczynniki do qPCR – wykład 5 |
|
13:30 – 14:30 |
Od planowania doświadczenia do publikacji zgodnie z wymogami MIQE - Minimum Information for Publication of Quantitative Real Time PCR Experiment) – wykład 6 |
|
14:30 – 15:00 |
Omówienie wyników doświadczeń |
Prowadzący: Dr hab. Tadeusz Malewski,
Termin: 10 – 11 marca 2017 roku
Miejsce: Muzeum i Instytut Zoologii PAN, ul. Wilcza 64 Warszawa
Karty Zgłoszenia oraz opłaty należy przesyłać do dnia 3 marca 2017 r.
Ponieważ ilość miejsc jest ograniczona organizatorzy zastrzegają sobie prawo do wcześniejszego zamknięcia listy w przypadku wyczerpania wolnych miejsc.
Dodatkowych informacji udziela:
Dr Arleta Malewska: mbs@mbs.biz.pl, Tel (22) 668 24 83; 607 929 471
Opłata za udział w kursie wynosi 1200 zł netto + 23% VAT.
Zamawiający zwolniony z podatku VAT proszony jest o dostarczenie drogą elektroniczną (e-mail: mbs@mbs.biz.pl) stosownego oświadczenia
Opłata obejmuje:
Opłatę należy wpłacić na konto:
MBS Szkolenia, Konferencje, Usługi Sp. z o.o.
03-766 Warszawa, ul. Grajewska 6/8 m. 26
Bank Polska Kasa Opieki S.A. Oddział w Warszawie
80 1240 6074 1111 0010 4915 6042
NIP 113 286 12 19; REGON 146448470; KRS 0000444499
Przy wpłacie prosimy o podanie nazwiska osoby, której udział w kursie jest opłacany.
Uczestnicy otrzymają certyfikat ukończenia szkolenia
